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什么是核酸分子雜交 核酸雜交


一、分子雜交的原理
【什么是核酸分子雜交 核酸雜交】分子雜交是一種核酸和蛋白質(zhì)的分析方法，用于檢測混合樣品中特定核酸分子或蛋白質(zhì)分子的存在和相對含量 。基本原理是待測單鏈核酸或蛋白質(zhì)分子與已知序列的單鏈核酸或抗體(稱為探針)通過堿基配對或免疫反應(yīng)形成可檢測信號 。在分子雜交過程中，核心是印跡轉(zhuǎn)移技術(shù)，先在凝膠上分離出DNA、RNA和蛋白質(zhì)，使相對分子量不同的分子鋪展在凝膠上，再通過影印將凝膠上的樣品轉(zhuǎn)移到固相支持物上 。在這個(gè)印跡過程后，標(biāo)記的探針或抗體與濾膜上的核酸或蛋白質(zhì)分子雜交，從而判斷樣品中是否存在與探針或蛋白質(zhì)分子同源的核酸分子與抗體反應(yīng)，并猜測相對分子量 。
二、分子雜交的發(fā)展過程
霍爾等人于1961年研究了核酸雜交技術(shù) 。該方法的原理是探針與溶液中的靶序列雜交，通過平衡密度梯度離心分離雜交體，檢測靶序列的含量 。這種方法費(fèi)時(shí)、費(fèi)力、不準(zhǔn)確，但發(fā)展了核酸雜交技術(shù)的研究 。20世紀(jì)60年代中期，尼加德等人的研究為應(yīng)用標(biāo)記的DNA或RNA探針檢測固定在硝酸纖維素膜上的DNA序列奠定了基礎(chǔ) 。20世紀(jì)70年代，分子生物學(xué)技術(shù)取得突破 。固定化的聚瓊脂糖凝膠和寡聚纖維素使人們能夠從總核糖核酸中分離聚腺苷酸+基因，用于檢測基因的表達(dá) 。限制酶的發(fā)展和應(yīng)用使分子克隆成為可能 。各種載體系統(tǒng)的誕生，特別是質(zhì)粒和噬菌體載體的構(gòu)建，豐富了特異性DNA探針的來源 。人們可以從基因組DNA文庫和c DNA文庫中獲得特定的基因克隆，只需培養(yǎng)細(xì)菌就可以提取大量的探針DNA 。目前，核酸雜交技術(shù)在用非放射性物質(zhì)替代放射性同位素標(biāo)記探針、簡化實(shí)驗(yàn)操作、縮短雜交時(shí)間等方面取得了很大進(jìn)展，使得核酸雜交技術(shù)越來越簡單、快速、廉價(jià)、安全 。將電泳分離的蛋白質(zhì)成分轉(zhuǎn)移到固定膜上，即蛋白質(zhì)印跡(即蛋白質(zhì)印跡) 。1979年由四個(gè)研究小組(Houvet D，Renart J，Erlich H，Towbin H)首次報(bào)道，但現(xiàn)在Towbin H等人使用的方法被廣泛使用 。這種方法實(shí)際上是從1975年的南方基因印跡發(fā)展而來的 。因此，Western雜交不是真正的分子雜交，而是檢測濾膜上是否存在抗體探針識別的蛋白質(zhì)的免疫反應(yīng) 。
三.分子雜交的類型
根據(jù)檢測對象，分子雜交可分為以下幾類 。(1)Southern印跡:通過電泳分離DNA片段，從凝膠轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素濾膜或尼龍膜上，然后與探針雜交 。檢測對象是DNA，探針是DNA 。

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