細(xì)胞污染，該如何應(yīng)對(duì)？

對(duì)于養(yǎng)細(xì)胞的科研工作者，可謂是談“污”色變，在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，不論是成手還是新手，都無法避免的遭受過細(xì)胞污染的“禍害” ，不管是細(xì)菌、真菌、黑膠蟲還是支原體，一旦招惹上這幾個(gè)家伙，各個(gè)都是來者不善，甚至讓您的細(xì)胞面臨“絕種”的風(fēng)險(xiǎn) 。針對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)當(dāng)中面臨的最普遍的問題，作為科研工作者的我們必須清楚認(rèn)識(shí)這些微生物，并通過技術(shù)手段判斷細(xì)胞遭受了哪種污染，準(zhǔn)確的對(duì)癥下藥，才能為我們的細(xì)胞保駕護(hù)航。
1 細(xì)菌污染
1.1 細(xì)菌污染的鑒別
細(xì)菌污染是細(xì)胞培養(yǎng)當(dāng)中最常出現(xiàn)的污染類型，槍頭不小心碰到瓶壁、手不小心從培養(yǎng)瓶口處穿過、培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)瓶，不經(jīng)意的一個(gè)小動(dòng)作，都可能會(huì)造成細(xì)菌污染，以致于實(shí)驗(yàn)前功盡棄。
細(xì)菌污染在沒有爆發(fā)或培養(yǎng)體系中含有雙抗時(shí) ，細(xì)菌污染較容易被科研工作者忽視，黑點(diǎn)在顯微鏡下一穿而過，小黑點(diǎn)因?yàn)閿?shù)量少且移動(dòng)迅速而不易發(fā)現(xiàn) 。隨著細(xì)菌在培養(yǎng)體系中的增多或者體系中撤掉雙抗以后，細(xì)菌可以從鏡下明顯識(shí)別，會(huì)呈現(xiàn)黑色條狀、棒狀、球狀，培養(yǎng)基的外觀也會(huì)發(fā)生明顯的變化，培養(yǎng)變渾濁，有細(xì)沙狀沉淀，有時(shí)會(huì)伴有臭味。

本文插圖

細(xì)菌污染

1.2 細(xì)菌污染的解決方式

一般的細(xì)胞培養(yǎng)體系中，普遍采用雙抗或者三抗進(jìn)行細(xì)菌的預(yù)防，但這兩者存在一定的局限性，比如只能預(yù)防，而不能拯救已經(jīng)細(xì)菌污染的細(xì)胞。另外，很多科研工作者從事原代的細(xì)胞分離和培養(yǎng)工作，在從動(dòng)物身上取材并分離培養(yǎng)的過程中，極易造成細(xì)菌污染，如果只是加入雙抗或三抗進(jìn)行沖洗組織，細(xì)菌污染無法避免，造成了珍貴動(dòng)物組織的浪費(fèi) 。
好物推薦-迪醫(yī)明（Deeming）細(xì)胞污染高效清除劑
Deeming細(xì)胞污染高效清除劑，不僅兼具雙抗或三抗預(yù)防細(xì)菌的功效，還可以清除支原體污染，有效消除真菌和細(xì)菌的污染，只需1-3天就可顯著抑制支原體、真菌、細(xì)菌的增殖，本產(chǎn)品經(jīng)過了上百種細(xì)胞的測試和長期的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，完美兼具高效和廣譜清除細(xì)胞污染物的能力，對(duì)細(xì)胞生長幾乎無影響，最大程度上挽救您的細(xì)胞。
2 真菌污染
2.1 真菌污染的鑒別
實(shí)驗(yàn)室污染的真菌一般為三類：念珠菌、酵母菌、霉菌，細(xì)胞污染真菌通常不易察覺，只有霉菌會(huì)逐漸出現(xiàn)細(xì)絲團(tuán)狀漂浮物，較容易從外觀發(fā)覺污染，其他真菌污染不像細(xì)菌污染培養(yǎng)基會(huì)渾濁，污染后培養(yǎng)液清澈透亮，與未污染的細(xì)胞從外觀上看無明顯變化。在顯微鏡下比較容易判斷污染類型，念珠菌呈卵圓狀，在細(xì)胞周邊生長，酵母菌出芽生殖時(shí)有明顯的一大一小連體結(jié)構(gòu) ，霉菌可觀察到菌絲體，菌絲呈絲狀、管狀、樹枝狀。

本文插圖

真菌污染

2.2 真菌污染的解決方式

真菌污染由于不容易通過培養(yǎng)基的變化來判斷，一般發(fā)現(xiàn)時(shí)就是已經(jīng)爆發(fā)了，鏡下會(huì)出現(xiàn)明顯團(tuán)狀或黑色絲狀污染物，細(xì)胞狀態(tài)明顯變差，很難救活。傳統(tǒng)的預(yù)防真菌污染的方式為培養(yǎng)體系中加入三抗，但是一旦發(fā)生真菌污染，三抗對(duì)于明顯的真菌污染就顯得心有余而力不足，此時(shí)建議如果是還留存種子的細(xì)胞就立刻扔掉，徹底消毒滅菌細(xì)胞房和CO2培養(yǎng)箱，扔掉可能被污染的培養(yǎng)基，對(duì)用過的實(shí)驗(yàn)器材進(jìn)行滅菌。
好物推薦-迪醫(yī)明（Deeming）真菌清除劑
真菌清除劑用于防止細(xì)胞培養(yǎng)過程中的真菌（包括酵母）污染，還可用于消除細(xì)胞培養(yǎng)物中的真菌（含酵母）污染。療效遠(yuǎn)超真菌抗生素兩性霉素B ，對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)過程中的真菌污染，如白色念珠菌、曲霉、酵母有很好的療效。
真菌清除試劑經(jīng)過了上百種細(xì)胞的測試和長期的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，只需1-3天就可以抑制真菌增長。對(duì)細(xì)胞基本無害，具有高效、特異性殺滅的特點(diǎn) ，最大程度上挽救珍貴的細(xì)胞，減少真菌污染帶來的損失。
3 黑膠蟲污染
3.1 黑膠蟲污染的鑒別
“黑膠蟲”是一種常見的細(xì)胞污染物，與細(xì)胞共生，隨細(xì)胞傳代而傳代。 “黑膠蟲”與細(xì)胞競爭性生長，對(duì)細(xì)胞生長不利，嚴(yán)重時(shí)導(dǎo)致細(xì)胞死亡。目前很多細(xì)胞存在被“黑膠蟲”污染的現(xiàn)象，對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)及其后續(xù)實(shí)驗(yàn)造成了極大地影響。 “黑膠蟲”污染的細(xì)胞常見的特性有以下幾點(diǎn)：（1）培養(yǎng)基不渾濁，但在顯微鏡下觀察細(xì)胞時(shí) ，細(xì)胞周圍和培養(yǎng)液中有很多“小黑點(diǎn)” ，且隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長“小黑點(diǎn)”逐漸增多，更換培養(yǎng)液或洗滌細(xì)胞不能將其去除；（2）“黑膠蟲”污染的細(xì)胞，營養(yǎng)消耗快，需要頻繁更換培養(yǎng)液；（3）“黑膠蟲”污染的細(xì)胞生長緩慢，細(xì)胞狀態(tài)差，空泡化嚴(yán)重，甚至還可能導(dǎo)致細(xì)胞形態(tài)的改變。