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精確制導(dǎo)，一擊即中---人細(xì)小病毒B19血清學(xué)檢測之抗原選擇

B19病毒的流行病學(xué)

人細(xì)小病毒B19（HumanParvovirus B19）是常見的病毒之一 。 1975年 ， 在對無癥狀獻(xiàn)血者的血液樣本進(jìn)行乙型肝炎病毒篩查時 ， 首次發(fā)現(xiàn)了這種病毒 。 由于其是在B組的第19號樣本中發(fā)現(xiàn)的 ， 故命名為B19病毒 。
B19病毒是全球性常見的人類傳染病原體 ， 可引起諸如貧血、流產(chǎn)、關(guān)節(jié)炎等 。 調(diào)查B19病毒的IgG抗體陽性率 ， 結(jié)果發(fā)現(xiàn) ， 1-5歲的兒童為2%-15% ， 6-19歲的兒童為15%-60% ， 成人為30%-60% ， 老年人為85%以上 。
B19病毒感染的臨床表現(xiàn)受感染者的年齡和免疫狀態(tài)等因素影響 。 在B19病毒的感染中 ， 孕婦感染尤其引起重視 。 據(jù)統(tǒng)計 ， 每年育齡婦女的血清轉(zhuǎn)換率約1.5% 。
當(dāng)前 ， 各國均出臺B19病毒相關(guān)的診療指南或?qū)＜夜沧R 。 包括美國婦產(chǎn)科醫(yī)師學(xué)會、加拿大母胎醫(yī)學(xué)委員會和歐洲等國家均明確：若孕婦接觸了B19病毒 ， 應(yīng)檢測特異性IgG和IgM ， 以判斷是否產(chǎn)生危害 。
中國在2020發(fā)布《TORCH實驗室規(guī)范化檢測與臨床應(yīng)用專家共識》 ， 強(qiáng)調(diào)孕期應(yīng)防范原發(fā)感染 ， 推薦定量檢測特異性IgG和IgM來判斷感染狀態(tài) 。 見圖1 。

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圖1：人細(xì)小病毒B19感染孕期檢測流程B19病毒的血清學(xué)檢測及抗原選擇
2021年4月 ， 國家藥品監(jiān)督管理局發(fā)布《人細(xì)小病毒B19 IgM/IgG抗體檢測試劑注冊技術(shù)指導(dǎo)原則》 ， 對B19病毒的抗體檢測試劑進(jìn)行明確指導(dǎo),推薦使用結(jié)構(gòu)蛋白進(jìn)行抗體檢測 。 如圖2 。 VP2是結(jié)構(gòu)蛋白中被研究最深入的蛋白之一 。

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圖2：推薦使用結(jié)構(gòu)蛋白檢測人細(xì)小病毒B19的特異性抗體 我們嘗試從蛋白質(zhì)組學(xué)角度理解該建議 。 B19病毒是一種小型無包膜的ssDNA病毒 。 其編碼主要蛋白有衣殼蛋白VP1、衣殼蛋白VP2和非結(jié)構(gòu)蛋白NS1 ， 如圖3 。 衣殼蛋白呈二十面體對稱排列 。 據(jù)研究 ， VP2約占總衣殼蛋白95% ， VP1約占5% 。

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【精確制導(dǎo)，一擊即中---人細(xì)小病毒B19血清學(xué)檢測之抗原選擇】
通過蛋白質(zhì)印跡法 ， 用特異性抗體檢測病毒衣殼蛋白的表達(dá) 。 發(fā)現(xiàn)衣殼蛋白VP2（58kDa）在感染后12h-24h內(nèi)開始積累 。 感染后VP2蛋白積累與VP-mRNA表達(dá)量增加的時間段非常吻合 。 此外 ， 沒有觀察到衣殼蛋白VP1（84kDa）的信號 。 如圖4 。

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圖4：衣殼蛋白VP2的蛋白表達(dá)動力學(xué)
另有研究表明 ， 分別使用VP2重組蛋白與B19病毒裂解物 ， 檢測臨床血清（含特異性IgG和IgM） ， 兩者具有高的相關(guān)性 。 如圖5 。

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有基礎(chǔ)研究證明 ， 結(jié)構(gòu)蛋白VP2在哺乳動物或昆蟲細(xì)胞中表達(dá) ， 在不存在病毒DNA的情況下可以自組裝 ， 形成結(jié)構(gòu)與病毒粒子相似的蛋白 ， 也就是病毒樣顆粒 。 該研究稱VP2病毒樣顆粒的免疫原性和免疫反應(yīng)性類似天然病毒粒子 。 如圖6 。

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圖6：衣殼蛋白VP2病毒樣顆粒的電鏡掃描
總結(jié)
人細(xì)小病毒B19作為一種重要的人類病原體 ， 在免疫力低下的患者中可引起嚴(yán)重疾病 。 隨著對病毒的認(rèn)識日益增強(qiáng) ， 血清學(xué)診斷的價值也被重視 。 診療指南、試劑注冊指導(dǎo)原則、醫(yī)療收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)等驅(qū)動因素日益完善 ， 也從側(cè)面證明血清學(xué)診斷在B19病毒防治中的價值 。
抗原是抗體檢測試劑的關(guān)鍵 。 我們推薦衣殼蛋白VP2病毒樣顆粒用于特異性IgG和IgM檢測 。 VP2占總衣殼蛋白約95% ， 在病毒感染12h后開始在體內(nèi)表達(dá)累積 ， 是急性感染/早期感染出現(xiàn)的標(biāo)志物之一 。 此外 ， 重組VP2蛋白可自組裝成病毒樣顆粒 ， 蛋白結(jié)構(gòu)與天然病毒粒子相似 ， 可以最大保留免疫反應(yīng)性 。 使用VP2病毒樣顆粒 ， 在技術(shù)上更符合試劑注冊指導(dǎo)原則的要求 。

參考文獻(xiàn)1.Human parvovirus B19. 2.Parvovirus infection. 3.Clinical manifestations and diagnosis of parvovirus B19 infection. 4.Clinical manifestations and treatment of Epstein-Barr virus infection. 5.TORCH實驗室規(guī)范化檢測與臨床應(yīng)用專家共識（2020）. 6.人細(xì)小病毒B19IgM/IgG抗體檢測試劑注冊技術(shù)指導(dǎo)原則.本文轉(zhuǎn)載自其他網(wǎng)站 ， 不代表健康界觀點(diǎn)和立場 。 如有內(nèi)容和圖片的著作權(quán)異議 ， 請及時聯(lián)系我們（郵箱：guikequan@hmkx.cn）

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